本文是学习GB-T 16125-2012 大型？急性毒性实验方法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了大型滏急性毒性实验方法。
本标准适用于评价可溶性化学物质的毒性、工业废水及固体废弃物浸出液的综合毒性、废水的处理
效果、地表水、地下水及水中沉积物的毒性。
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法
GB12997 水质 采样方案设计技术规定
GB12998 水质 采样技术指导
GB12999 水质采样 样品的保存和管理技术规定
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
半数有效浓度 median effective concentration
ECso
在24 h 或48 h 内50%暴露在实验液中大型滏活动受抑制(包括死亡)的浓度。
3.2
活动抑制 immobilization
轻轻摇动实验容器，若15 s
之内大型滏不能游动，认为其运动能力受到抑制，即使其触角仍能活
动，也应算做活动受抑制的个体。
本标准用大型滏为实验生物，将大型滏置于一系列浓度的实验溶液中，计数24 h
和48 h 大型滏活 动能力受到抑制(包括死亡)的数量，计算24 h 和48h
半数有效浓度(24 hECs 和48hEC), 判断实验
溶液的毒性程度。实验分为两个阶段：预实验和正式实验。
本标准所用试剂均为符合国家标准的分析纯化学试剂，实验用水要求参照GB/T
6682。
GB/T 16125—2012
大型滏(Daphnia magna Straus)(甲壳纲，枝角亚目)62Dm
纯品系生物株为实验涵种。实验用滏
取同龄同母体后代，培养1代～3代、出生6 h～24h
的幼蚤。实验用大型滏培养繁殖方法参见附录 A。
5.3.1 配制的标准稀释水 pH 为7.8±0.2;硬度为250 mg/L±25 mg/L(以 CaCO₃
计),Ca/Mg 比例
接近4:1;溶解氧浓度在空气饱和值的80%以上；不应含有任何对大型滏有毒的物质。
5.3.2 标准稀释水用电导率小于10μS/cm 的纯净水按下述方法配制：
氯化钙溶液：将11.76 g 氯化钙(CaCl₂ ·2H₂O) 溶于水中稀释至1 L;
硫酸镁溶液：将4.93 g 硫酸镁(MgSO₄ ·7H₂O) 溶于水中稀释至1 L;
碳酸氢钠溶液：将2.59 g 碳酸氢钠(NaHCO₃) 溶于水中稀释至1 L;
氯化钾溶液：将0.25 g 氯化钾(KCI) 溶于水中稀释至1 L;
各取以上四种溶液25 mL 混合，稀释至1 L。 调节 pH,
使其稳定在7.8±0.2。标准稀释水应容许
大型滏在其中生存至少48 h。
可采用未被有毒物质污染的天然水(地面水或地下水)及自来水(自然曝气的),其pH
为7.0～8.5,溶
解氧4 mg/L 以上，水的硬度为250 mg/L±22 mg/L(以 CaCO₃ 表示)。
6.1
可采用小烧杯等玻璃制品，或者依据化合物的性质选择合适的实验容器，实验容器上加盖表面皿。
为防止玻璃容器对实验物质的吸附，实验前可用低浓度实验溶液浸泡容器(空白对照组除外)1
d。
6.2 量筒、容量瓶、移液管、滴管、玻璃缸、尼龙筛网。
溶解氧测定仪、水质硬度计、pH 计、温度计、电导仪、体视显微镜。
7.1.1 按照GB12997 、GB12998 、GB12999
的规定。采集废水样品时，应将采样瓶充满水样，不留空
气。采集水质不稳定的工业废水，应在24 h 之内，每隔6 h
采样一次，分别测定每个样品，求得其最大 毒性。
7.1.2 样品采集后应立即进行实验。如果样品采集后6 h
之内不能进行实验，宜将水样冷藏保存 (0℃~4℃);超过6
h,宜将水样冷冻保存(一18℃),保存时间不超过2个月。
7.2.1
受试物可以是可溶于水的固体、液体或气体，但要求组分一定，具有代表性、重复性。
7.2.2
易溶于水的实验物质可直接加到稀释水中，也可以溶解在蒸馏水中配成贮备液加入到稀释水中
配成实验液。贮备液应低温保存。难溶于水的物质，可使用超声波装置及其他低毒助溶剂增溶的方法，
将其溶解和分散。如果使用助溶剂，助溶剂在实验液中的浓度不应超过0.5 mg/L。
7.2.3
工业废水原水样为实验原液，作为100%,用稀释水按百分数(百分率)配制成各实验浓度。
7.2.4
固体废弃物或水中沉积物。首先磨碎，按固液1:10比例加入蒸馏水，摇匀后浸泡24
h, 滤纸过
滤，滤过液为被测工业固体废物或水中沉积物的浸出原液(100%),再用稀释水按百分数配制成各浓度。
GB/T 16125—2012
以受试物在实验液中的最大溶解度作为限度实验浓度(若该物质的最大溶解度大于100
mg/L, 则 以100 mg/L
作为实验浓度),实验结束时，如果大型滏的活动抑制率低于10%,则不需进行下一步实
验，否则应按照实验程序进行完整实验。
8.2.1
正式实验之前，为确定实验浓度范围，应进行预实验，除非有可参考的毒性数据。先将大型滏暴
露于范围较广的浓度系列(如0. 1 mg/L、1mg/L、10 mg/L 或 1
mg/L、0.1mg/L、0.01 mg/L)中24 h,
每个浓度至少放5个幼蚤，通过预实验找出被测物使大型滏全部存活(或无活动抑制)的浓度以及全部
死亡(或不动)的浓度，然后在此范围内设计出正式实验中各组的浓度。
8.2.2 应了解毒物的稳定性，在稀释水中是否会出现沉淀、pH
等理化性质的改变，以便确定正式实验
是否需要采取流水或更换实验液及改变稀释水 pH 等措施。
8.3.1
实验浓度设计。根据预实验的结果确定正式实验的浓度范围，按几何级数的浓度系列(等比级
数间距)设计5个～7个浓度。实验浓度要设计合理(等比级系数不超过2.2,如1、2、4、8、16
等比级系
数为2),最高浓度处理组大型滏全部死亡(或不动),最低浓度处理组大型滏全部存活(或无活动抑制),
系列浓度中以能出现一个大型滏活动抑制率在40%～60%的浓度最为理想。
8.3.2 每个实验浓度置大型滏5个，平均每个大型滏的实验液不少于2 mL 。
每个实验浓度设3个平
行。以不添加受试样品的实验组为空白对照组，内装与处理组相等体积的稀释水。如使用助溶剂，则应
设置溶剂空白对照组。实验前要用化学方法测定实验液的初始浓度。实验开始及结束时测定实验液的
pH、 水温和溶解氧(DO)。
对不稳定性实验液采用定时更换的措施，实验期间大型滏不喂食。
8.3.3 实验开始后应于24 h 及 4 8 h
定时进行观察，记录每个容器中仍能活动的大型温数，测定0%~
100%大型滏活动抑制或死亡的浓度范围，并记录它们任何不正常的行为。
9.1 检查大型滏的敏感性及实验操作步骤的一致性，定期测定重铬酸钾的24
hECso,20℃ 时重铬酸
钾的24 h ECs应在0.5 mg/L～2.0 mg/L之间。
9.2 对照组(包括空白对照组和溶剂对照组)大型滏的受抑制率不能超过10%。
9.3
应经检测证明受试物浓度保持于实验全过程(至少应为计划配制浓度的80%)。如果浓度偏差
>20%,应以测试浓度结果为准。
9.4 实验开始和结束时，对照和处理组的实验用液 pH
变化范围不超过1.5;实验前的培养温度应与
实验温度一致，实验可在18℃~22℃下进行，但同次实验温度的变化不超过±1℃。实验应在没有对
大型滏有害的气体、粉尘的大气条件下进行。实验结束时，所有对照组和实验组溶解氧浓度应大于或等
于2 mg/L。
实验在自然光照(避免阳光直射)或光照周期(光暗比)为16:8,光照强度\<10001x。
9.5
实验期间，应保持实验室条件正常，若出现停电、停水等情况而影响实验的，应及时停止实验，待实
验室条件恢复正常后重新进行实验。
GB/T 16125—2012
10.1.1 结果的计算
计算24 h 和48 h 对照组和各处理组实验滏活动受抑制数及百分率。以24 h
和48 h 抑制百分率
与受试物浓度做剂量-效应曲线，选择合适的统计方法(如概率单位法或寇氏修正法)计算24
h ECs 和
10.1.2 结果的表示
以24 h ECs 或48 hECs
表示受试物质在相应时间内对大型滏运动能力抑制的程度。当浓度间距
过近仍不能获得足够数据时，可采用使100%大型滏活动受抑制(包括死亡)的最低浓度和大型滏活动
不受抑制(包括死亡)的最高浓度来表示毒性影响的结果。
检测化学物质样品时，以 mg/L 表示，计算结果保留3位有效数字。
检测废水样品、固体废弃物或水中沉积物浸出液时，以百分数或 mL/L
表示，计算结果保留3位有
效数字。
实验报告要求包括以下几个方面：
— 实验用滏的种名、来源、数目、滏龄、饵料、重铬酸钾的24 h ECso;
——对照组是否发生死亡；
——实验条件下大型滏的任何不正常行为、中毒症状；
—受试物的名称、化学性质、来源、样品的保存方法、保存时间及前处理方法；
——实验环境条件，实验用稀释水的性质，如水温、pH、
溶解氧、电导率等情况；
——实验结果、数据处理、结论；
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